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    如何正確選擇細胞培養基

    2018-06-25 瀏覽次數:1686

    Hylone、HAKATA培養基,常備現貨,*

    如何正確選擇細胞培養基

    細胞培養是實驗室里zui常見和zui基本的實驗了,但卻不是zui簡單的。別小看細胞培養,這里可蘊含著大學問。有時候細胞狀態不好,轉染、藥篩這些實驗根本就沒辦法做。影響細胞培養的因素很多,讓我們先從培養基和血清說起。 

    Hylone、HAKATA培養基,常備現貨,*

    經典的培養基有很多種,HAKATAHyClone、Sigma等。其中DMEM、RPMI-1640、MEM、DMEM/F12都是應用zui廣泛的培養基。其他如M199、IMDM、L15培養基等也用于某些細胞的培養。 

    ◆ MEM是由Eagle’s基礎培養基(BME)發展而來的,其中增加了組分的范圍及濃度。 

    ◆ Dulbecco改良的BEM(DMEM)培養基是為小鼠成纖維細胞設計的,現在常用于貼壁細胞的培養。

    DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍,維生素濃度是MEM的4倍,采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。zui初的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L,后來為了某些細胞的生長需要,將葡萄糖含量又調整為4500 mg/L,這就是大家常說的低糖和高糖了。 

    ◆ aMEM含有附加的氨基酸、維生素以及核苷和脂肪酸,它可廣泛應用于各種細胞類型,包括對營養成分要求苛刻的細胞。 

    ◆ Ham’s F12是為在低血清濃度下克隆CHO細胞而設計的,現在也廣泛應用于克隆形成率的分析及原代培養。F12還可以與DMEM等體積混合使用,得到一種高濃度與成分多樣化相結合的產物,這種培養基已應用于許多原代培養及更難養的細胞系的培養。 

    ◆ RPMI-1640培養基是專為淋巴細胞培養而設計的,現在已廣泛應用于懸浮細胞的培養。 

    Hylone、HAKATA培養基,常備現貨,*

    以前經常聽到有人問,這種細胞該用哪一種培養基呢?其實這個問題的答案可以很簡單,也可以好復雜。此話怎講?如果這種細胞是購自ATCC 或其他的細胞庫,那很簡單,問供應商就行了。或者找到相關的文獻,作為參考。 Invitrogen上有一個Cell Line Database的工具,也很好用。選擇你感興趣的細胞類型,它就會彈出推薦的培養基、血清和轉染試劑等,有時還有優化好的轉染步驟很方便。Sigma上也有一個Media Expert,包括了培養基所有成分的功能描述、使用推介和參考文獻等,它還是一個解決問題能手,對于細胞培養中的常見問題,如細胞貼壁不好、培養基變色等,它都會列出可能的原因,并提供補救辦法。這個Expert果然不簡單!  但如果你是著手建立一種全新細胞的培養體系,根本找不到任何參考,那你就得花點時間自己試驗了。萬事開頭難嘛。因為沒有一個標準答案。在MEM中培養的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之,shou選MEM做貼壁細胞培養、RPMI 1640做懸浮細胞培養會是一個好的開始。你也可以購買幾種培養基來,然后花大約兩周的時間做一個簡單的細胞生長實驗,來選擇其中zui適合的。有時候你會驚訝地發現你的zui佳培養條件與文獻報道的不同,就算是同一種培養條件,細胞的生長狀態也時好時壞,這是很正常的。因為試劑、水、不同批號的血清之間都存在著差異。要提高培養基的穩定性,可以從培養基和血清兩方面入手。 

    Hylone、HAKATA培養基,常備現貨,*

    以前大部分實驗室都是用干粉培養基,但配制過程就較為繁瑣,要溶解、調pH值,過濾,過程中可能會產生一些濃度誤差,而且有些實驗室的水質并不理想,所以培養的效果會有差異。如果使用液體培養基,這種人為的誤差會減少,因為畢竟是大批量工業化生產的,批間差會很小。大家是不是感覺液體培養基會貴很多,以前是這樣,但現在非也。HyClone和Invitrogen都在國內建立了液體培養基的生產基地,生產和運輸成本大幅降低,所以現在的價格也只是50-60元/500ml,比干粉培養基貴不了多少,而且還幫你省了過濾器和時間。 

    血清含有生長因子可促進細胞的繁殖,含有附著因子可促進細胞的貼壁,同時還具有抗胰酶活性。血清同時也是礦物質、脂類及激素的來源。zui常用的血清有小牛血清、新生牛血清、胎牛血清和馬血清等。牛血清是按照采血時間的早晚來分類的。采血時間越早,營養物質越豐富,所含抗體也越少,因而胎牛血清適合要求高的細胞系和克隆化培養。由于瘋牛病的原因,到目前為止,我國政府仍然禁止從北美洲、歐洲和日本等地區進口牛血清,因此市面上的牛血清大多來自澳洲、南美洲,或是國產的。  而血清批次間的差別就是不可避免的,這種差異來源于不同的制備方法和除菌方法、動物的年齡差別及血清的儲存條件等,而且與取血動物的來源關系密切。不同的牧場、不同的氣候天氣及其他環境因素都可能影響血清的質量。因此選好了一種血清就要盡可能長期使用它。在需要更換時,也要盡量保持與原有的一批血清相似。

    Hylone、HAKATA培養基,常備現貨,*

    現在很多公司都提供血清預留,你一旦選定了某個批次的血清,zui好備足一年的量,這樣可以避免很多麻煩。血清固然是細胞培養中*的成分,但正如上文所說,血清的批間差異大,更換血清時需要做大量的測試以取保替換的血清與原來的相似。而血清的供應也是必須要考慮的因素。由于氣候或瘋牛病的影響,說不定哪天血清就突然沒得賣了,那對實驗的影響可非同小可。另外,血清的價格也很昂貴,雖說現在也有便宜的國產血清,但是高品質的澳洲血清價格仍舊高。因此,也有一些實驗室開始換用無血清培養基。 

    Hylone、HAKATA培養基,常備現貨,*

    常備現貨液體培養基:

    Hylone 雙抗

    SV30010

    100ml

    HAKATA 雙抗

    15140-122

    100ml

    Hylone 胰酶

    SH30042.01

    100ml

    HAKATA 胰酶

    25200-056

    100ml

    DMEM低糖

    SH30021.01

    500ml

    HAKATA 胰酶

    25200-072

    500ml

    DMEM高糖(不含丙酮酸鈉)

    SH30022.01

    500ml

    HAKATA B-27™ 添加劑

    17504-044

    10ml

    DMEM/F12 1:1

    SH30023.01

    500ml

    HAKATA B-27™ 添加劑

    12587-010

    10ml

    MEM/EBSS

    SH30024.01

    500ml

    RPMI1640培養基

    31800-022

    10*1L

    HAM'S/F12

    SH30026.01

    500ml

    DMEM培養基(高糖)含丙酮酸鈉

    12800017

    10*1L

    IMDM

    SH30228.01

    500ml

    DMEM培養基(高糖) 不含丙酮酸鈉

    12100046

    10*1L

    DMEM高糖(含丙酮酸鈉)

    SH30243.01

    500ml

    DMEM高糖培養基

    C11995500BT

    500ml

    M199/EBSS

    SH30253.01

    500ml

    DMEM低糖培養基

    C11885500BT

    500ml

    PBS緩沖液

    SH30256.01

    500ml

    PBS

    C10010500BT

    500ml

    α-MEM

    SH30265.01

    500ml

    1640培養基

    C11875500BT

    500ml

    改良型RPMI-1640

    SH30809.01

    500ml

    DMEM/F12

    C11330500BT

    500ml

     

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