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    HT-29,人結腸癌細胞常備細胞說明

    2019-05-28 瀏覽次數(shù):1073

    HT-29,人結腸癌細胞常備細胞說明

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    細胞樣本收集標準-收集貼壁細胞步驟:

    1.移除細胞培養(yǎng)基。

    2.沿著培養(yǎng)皿壁緩慢加入PBS(無鈣鎂離子),勿將細胞沖離培養(yǎng)皿,溫和晃動培養(yǎng)皿,清洗細胞表面。

    3.移除PBS。

    4.加入細胞消化液(如胰蛋白酶等),使消化液能覆蓋所有細胞。在37℃孵育2-3min,溫和晃動培養(yǎng)皿知道細胞開始剝離培養(yǎng)皿。

    5.加入培養(yǎng)基終止消化,溫和重懸細胞

    6.200X g,離心10min,收集細胞

    7.移除上清液,用PBS清洗細胞沉淀兩次

    8.后200X g,離心10min,收集細胞沉淀

    收集懸浮細胞步驟:

    1.將細胞懸液轉移至離心管中

    2. 200X g,離心10min,收集細胞

    3. 移除上清液,用PBS清洗細胞沉淀兩次

    4. 后200X g,離心10min,收集細胞沉淀

    送樣要求:

    1. 基因組DNA: OD 260/280 在1.8~2.0之間, 濃度≥50ng/μl,體積≥20μl;

    2. 新鮮細胞:(1)細胞數(shù)≥106;(2)貼壁細胞經(jīng)胰蛋白酶消化后,離心收集細胞沉淀;(3)懸浮細胞直接離心收集細胞沉淀;(4)PBS清洗細胞沉淀,盡可能去除培養(yǎng)基與胰酶;

    3. 凍存細胞:細胞數(shù)≥106,凍存細胞從液氮罐中,37℃水浴復蘇,融化后離心收集細胞沉淀,盡可能去除凍存液,否則會影響DNA抽提質量;

    4. 樣本寄送:應在送樣包裹中放置足量的冰袋或干冰,以減少在運輸過程中因溫度變化導致DNA降解的可能;如無法使用冷凍寄送,請將細胞沉淀用真空抽干(無殘留任何液體、不可加熱);

    5. 為了保證DNA抽提質量,確保細胞在消化或凍存前,細胞狀態(tài)良好,處于生長對數(shù)期;

    不建議以細胞懸液或細胞培養(yǎng)瓶形式寄送樣本

    客戶須知:

    1. 細胞系并非人體細胞,細胞來源的問題可能導致等位基因的不均一性,從而使STR位點具有潛在不均一性;

    2. 八個位點+性別鑒定以外的位點為翼和贈送的非標準位點,翼和保證結果的真實性,其復雜性會高于標準性位點.

    備注:

    1、用戶在寄送樣品時,請將此表打印和樣品一并放入包裝中,包裝用泡沫箱和冰袋,建議順豐快遞;

    2、人源細胞,公司會同DSMZ數(shù)據(jù)庫進行比較;數(shù)據(jù)庫無該類型細胞,則需要用戶自行上網(wǎng)比較

    寄送注意事項:細胞數(shù)量 10的6次方 左右 ,然后離心收集沉淀(如果是貼壁 先消化一下,如果是凍存的  先37度水浴復蘇10分鐘),收集沉淀離心后倒掉上清(用PBS清洗1遍,避免PCR抑制劑殘留影響結果),放入泡沫箱  +冰袋+送樣單填好打印,用順豐速運我們

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