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    hne1-lmp1轉(zhuǎn)入LMP1基因人鼻咽癌細(xì)胞

    2020-05-25 瀏覽次數(shù):605

     

    hne1-lmp1轉(zhuǎn)入LMP1基因人鼻咽癌細(xì)胞

    1) 來源:蒂科生物細(xì)胞庫(kù)

    2) 形態(tài):貼壁 上皮細(xì)胞樣

    3) 含量:>1x106 個(gè)/mL

    4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

    5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

    6) 運(yùn)輸:順豐發(fā)貨

    培養(yǎng)條件:

    培養(yǎng)基:RPMI-1640+10% FBS(推薦HAKATA貨號(hào):HN-FBS-500)

    溫度:37℃     氣相:95%空氣,5%二氧化碳

    傳代

    1.用75%酒精噴灑整個(gè)培養(yǎng)瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行1-3小時(shí)的緩沖,.然后置于無菌操作臺(tái),打開瓶口,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液以及傳代,一般2到3天換一次液

    2.待細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底面積80%-90%,需要對(duì)其進(jìn)行傳代,傳代比例為1:2到1:4

    3傳代步驟:將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預(yù)熱,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶,置于37°孵育消化(diyi次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為jia消化時(shí)間,記錄jia消化時(shí)間,以便于下次消化),消化好后加入3ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后收集細(xì)胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,進(jìn)行傳代。

    凍存:

    建議使用本公司無血清細(xì)胞凍存液貨號(hào):H-W-100,用4度保存的冷凍液直接重懸細(xì)胞,不能預(yù)熱后使用。

    保存條件:液氮存儲(chǔ)

    溫馨提示(常見問題,處理方式

    T25瓶為例;

    1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

    2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。

    3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

     

    對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

    1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

    2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

    3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

    4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

     

    注:diyi次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

    細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存

     

    蒂科生物論文基金獎(jiǎng)勵(lì)方法

    獎(jiǎng)勵(lì)對(duì)象:

    使用HAKATA系列產(chǎn)品(HAKATA全系列:血清、凍存液、試劑、細(xì)胞株等)培養(yǎng)細(xì)胞并在中文核心期刊雜志或SCI期刊雜志發(fā)表文章,且文章中材料和方法欄中標(biāo)注我公司品牌名或公司名(英文:HAKATA或Shanghai Chuanqiu Biotechnology Co.,Ltd, China,中文:HAKATA或蒂科生物)

    該獎(jiǎng)勵(lì)方案長(zhǎng)期有效,歡迎大家與我們分享獲得成果的喜悅!

    hne1-lmp1轉(zhuǎn)入LMP1基因人鼻咽癌細(xì)胞

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