【干貨】胎牛血清的使用方法，你都了解嗎？

血清是細(xì)胞培養(yǎng)中外源添加的成分不確定的物質(zhì)，血清的質(zhì)量對實驗成敗起著關(guān)鍵性作用，但血清使用不當(dāng)也可能會導(dǎo)致血清質(zhì)量下降，造成細(xì)胞培養(yǎng)效果不理想。今天來給大家聊聊血清使用中的一些疑惑，幫助大家理清頭緒，實驗開展順順利利。

怎樣確定血清使用濃度？

這個只能通過測試了。原則上血清添加量不要太多，通常分為5%、10%、20%幾檔。部分細(xì)胞原代提取時會使用20%血清，大部分細(xì)胞正常培養(yǎng)時會使用5%～10%的血清濃度。至于某一株細(xì)胞適應(yīng)什么樣的血清濃度，還需要根據(jù)細(xì)胞特性、實驗?zāi)康淖鰷y試和調(diào)校。

血清使用前需要離心嗎？

這個問題我理解為兩種可能。

其一，因為血清融解后有“絮狀物"析出。如果沒有出現(xiàn)其他異常情況，或者血清只是用于細(xì)胞培養(yǎng)，那么*沒有必要離心去除。我們知道血清析出的“絮狀物"主要是血纖蛋白，其在血清中含量很高，而且高度不溶，在血清凍融過程中極易析出，但它也是*無害的，甚至能促進(jìn)細(xì)胞生長。另外，它還增強(qiáng)了血清黏性，為細(xì)胞提供了額外的機(jī)械緩沖。在其析出過程中，會粘附培養(yǎng)體系中其他成分，離心去除，反而會損失營養(yǎng)成分。

其二，實驗要求純凈的培養(yǎng)體系。培養(yǎng)的細(xì)胞需要進(jìn)一步鑒定，如免疫熒光、流式、共聚焦拍照等，細(xì)胞表面如果有黏性較強(qiáng)的血纖蛋白，勢必會影響效果。那么，建議400g離心5min即可。如果需要進(jìn)行精密實驗，如分離外泌體等，那么就需要至少100000g離心1.5h以上

血清滅活和不滅活有什么不一樣？

在回答這個問題之前，我們先要弄清楚滅活究竟滅的是什么成分的活性。其實56℃、30min的處理只能去除補(bǔ)體和部分其他蛋白的活性。補(bǔ)體是免疫系統(tǒng)的一部分，在體內(nèi)可通過多條途徑被激活，從而發(fā)揮調(diào)理吞噬、裂解細(xì)胞、介導(dǎo)炎癥、免疫調(diào)節(jié)和清除免疫復(fù)合物等多種作用。血清滅活的說法最早是在細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)發(fā)展初期，大部分實驗室還在使用小牛血清甚至成體動物血清，或者以前培養(yǎng)某些人源細(xì)胞時會添加人血清。因為血清供體已與環(huán)境長期接觸，體內(nèi)免疫系統(tǒng)已經(jīng)經(jīng)歷了一場又一場的戰(zhàn)斗，而保留了“豐厚的戰(zhàn)利品"——抗體、補(bǔ)體等，這些成分在體內(nèi)可以由免疫系統(tǒng)清除，但在體外的細(xì)胞培養(yǎng)中，可能會對部分細(xì)胞產(chǎn)生損傷。巧在人們發(fā)現(xiàn)這些成分不耐受高溫，所以才有了熱滅活處理。

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)發(fā)展到今天，我們已經(jīng)能把控原材料的質(zhì)量。對于血清，我們會選擇胎牛來源。因為在體內(nèi)有胎盤屏障的隔離，又尚未接觸體外環(huán)境，其自身免疫系統(tǒng)、免疫物質(zhì)幾乎為零。這個時候，如果不是對血清成分的極度苛刻，再談滅活就有些多余了。甚至因為熱處理，導(dǎo)致血清內(nèi)大量蛋白析出，同時粘附其他成分一起丟失，對細(xì)胞培養(yǎng)而言就得不償失了。

怎樣為您的細(xì)胞選擇合適的血清？

目前市面上的血清產(chǎn)品五花八門，各種品牌宣稱來自各個血源地，讓人眼花繚亂。可以確定的是，除了所謂的“水貨"，它們當(dāng)中絕大多數(shù)都是質(zhì)量合格的產(chǎn)品。但合格不一定好用，或者說適用于某一種細(xì)胞。要確定一款血清的性能，或者從眾多血清來源中挑選一款，好的辦法就是篩選驗證。

血清的篩選驗證主要包括：形態(tài)驗證、增殖能力測試和克隆形成能力測試。我們通過多次傳代，分辨同細(xì)胞、同代次、不同血清樣品培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)間的細(xì)微差異；或者同血清樣品、不同細(xì)胞、不同代次間，細(xì)胞形態(tài)維持的情況。我們通過同一細(xì)胞多次傳代，每代接種相同細(xì)胞量，間隔相同時間后計數(shù)得到單位時間倍增數(shù)，確定增殖性能。又通過不同細(xì)胞在相同培養(yǎng)面積內(nèi)接種相同的少量的細(xì)胞，根據(jù)形成的單克隆數(shù)量、大小，判斷血清支持克隆形成的能力。

一款血清需要綜合達(dá)到這幾個性能的高水平表現(xiàn)，才能稱為好血清。或者一款血清在培養(yǎng)某種細(xì)胞時，這幾個方面的表現(xiàn)都優(yōu)秀，才是適用的。