抗體的儲存條件

抗體由于性質(zhì)和所使用的儲存條件不同，其存儲的“保質(zhì)期"可能從幾周到幾年不等。盡管每個抗體存儲的最佳條件是*的，但我們還是能夠總結(jié)出一些關(guān)于抗體存儲建議和一般準則。

抗體的儲存時間取決于抗體固有的性質(zhì)和儲存條件?？贵w（尤其是酶）必須存放在適當?shù)臏囟群蚿H值范圍。為了維持蛋白質(zhì)的活性、防止其聚集，經(jīng)常保存在一定濃度的甘油，蔗糖，或類似的物質(zhì)里面。

1、低溫儲存對于抗體的保存至關(guān)重要

一般來說，抗體最好存放在≤4℃的清潔，滅菌的玻璃或塑料管。貯存在室溫下通常會由于微生物的生長導(dǎo)致抗體退化和/或失活。抗體儲存液放在4℃環(huán)境中1天或者幾周內(nèi)其活性不會受到明顯影響。另外，抗體中可以加入終濃度為50％的甘油或乙二醇儲存于-20℃。通常我們?yōu)榱吮苊夥磸?fù)凍融，可以分裝抗體。我還可以加入抗微生物藥物（如疊氮化na或硫柳汞）以避免微生物的生長。

帶有標記的抗體最好存放在終濃度為50％的甘油或乙二醇里并防止在-20℃的環(huán)境中。盡管有些酶結(jié)合物可以不加抗凍劑儲存在-20℃，但是這些抗體必須分裝使用以防止反復(fù)凍融，尤其是堿性磷酸酶偶聯(lián)對凍融特別敏感。帶有標記的抗體通?？梢栽诟视突蛞叶贾杏?20℃保存1-2年。但是，在冷凍保護劑的污染物可能會影響酶的活性。

一些研究人員發(fā)現(xiàn)多克隆抗體在血清中于-20℃保存十年其活性損失不大。然而，一旦抗體被純化后，儲存在50%的甘油中于-20℃保存，即使沒有凍融，其活性的損失也可以觀察到，盡管其進程仍然非常緩慢。但許多研究者需要將這些多克隆抗體注射到動物體內(nèi)，為了避免內(nèi)毒素的干擾，一般都不加入甘油。而且大量研究表明：即使沒有甘油，只要你不反fu凍融，抗體也可以存儲在-20℃幾年甚至幾十年。另一個重要的事情是，該抗體濃度應(yīng)高于1毫克/毫升，因為稀的抗體容易失去活性而且容易造成物理吸附導(dǎo)致的損失。而單克隆抗體可以用兩種方式保存：第一，保存在50％的甘油存放于-20℃；第二，也是比較好的方式，將其保存在飽和硫酸銨于4℃或-20℃（4℃更好）保存。多年未見有失活、細菌滋生以及氧化。有些研究人員為了長期儲存抗體，將抗體分裝后放置于液氮中。然而抗體存儲在-20℃或-80℃更常見，因為凍融降低蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，所以我們一定要分裝抗體使用，這樣就可以避免抗體的反復(fù)凍融。而凍干法（冷凍干燥，干燥或從冰凍狀態(tài)）為一些冰凍以后不穩(wěn)定抗體提供了一種替代的保存方法。在大多數(shù)情況下，凍干的抗體最好是存放在-20℃。雖然冷凍干燥有許多優(yōu)點，它需要昂貴的設(shè)備和勞動力。

2、向抗體儲存液中加入抗氧化劑是防止抗體因氧化失效的關(guān)鍵步驟

氧化反應(yīng)是某些酶，尤其是巰基酶的共同問題。為了防止氧化反應(yīng)對抗體的破壞，我們可以向抗體中加入一些還原劑（如二硫蘇糖醇（DTT）或2 - 巰基乙醇（2-ME））。實驗證明：越高的pH環(huán)境和溫度，這些有酶活性的抗體的保存時間越短。此外，加入0.1mM的銅離子其氧化率增加，而加入金屬螯合劑EDTA增加其保存的有效期。

3、蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑和抗生素對于抗體的穩(wěn)定儲存也發(fā)揮著重要作用

蛋白質(zhì)穩(wěn)定試劑可以延長大多數(shù)蛋白質(zhì)在4℃或-20℃的保質(zhì)期。而25-50％的甘油或乙二醇等防凍劑有助于穩(wěn)定抗體，防止在-20℃環(huán)境中形成冰晶，避免其破壞蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。蛋白酶抑制劑的加入可以防止抗體發(fā)生水解反應(yīng)導(dǎo)致其失活。而抗微生物藥物，如最終濃度在0.02-0.05％（W / V）的疊氮化na（NaN3的）或終濃度為0.01％（W / V）的硫柳汞可以抑制微生物的生長。

4、抗體的儲存濃度對于抗體保存的有效期也有顯著影響

抗體濃度過低（<1毫克/毫升）更容易發(fā)生抗體的失活以及增加物理吸附造成的損失。因此，我們都要盡量的保持抗體（例如，大于1毫克/毫升）在儲存期間的濃度。通常的做法是添加“載體"蛋白質(zhì)，如純化牛血清白蛋白（BSA）以防止這種降解和損失。