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    T-47D人乳腺管癌細胞
    名稱 T-47D人乳腺管癌細胞
    型號
    報價
    特點 T-47D人乳腺管癌細胞公司集研發(fā)、銷售、實驗室技術(shù)服務(wù)于一體,并以多家歐美研究平臺先進的技術(shù)實力為依托,向中國市場提供品質(zhì)國內(nèi)價格的*服務(wù),專業(yè)提供實驗所需的各類細胞株,因子,抗體等多種生物試劑。公司細胞主要來源ATCC,ECACC,ScienCell,ACC, Invitrogen 等,以及少數(shù)國內(nèi)外大學(xué)}
    • 詳細內(nèi)容

    細胞名稱:T-47D人乳腺管癌細胞

    • 公司建立有標準化GMP細胞培養(yǎng)車間,依托引進ATCCDSMZECACCRIKEN、中科院、協(xié)和醫(yī)院引進保藏細胞種類近四千株,從來源,引進,培養(yǎng),凍存,復(fù)蘇,運輸,注重每一個環(huán)節(jié),提供活力強,代數(shù)靠前,優(yōu)質(zhì)細胞株細胞系。

     

     

    二、T-47D人乳腺管癌細胞

     

    傳代操作:

    1.吸除培養(yǎng)瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。

    2.加入無菌pbs洗液(5-8mL)輕輕潤濕細胞,稀釋多余的培養(yǎng)基,之后吸走洗液,動作要輕,不可吹打到細胞。

    3.向瓶內(nèi)加入含0.25%EDTA的胰蛋白酶混合液少許,以能覆滿瓶底為限。

    4.置溫箱中2~5分鐘,一旦鏡檢發(fā)現(xiàn)細胞質(zhì)回縮,細胞間隙增大后,細胞變圓,比較松動后,立即終止消化。

    5.加入該細胞對應(yīng)的培養(yǎng)基6mL(T25培養(yǎng)瓶)或12mL(T75培養(yǎng)瓶)終止消化。

    6.用吸管通過吸取的培養(yǎng)基輕輕反復(fù)吹打瓶壁細胞,使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時應(yīng)盡量以zui少的次數(shù)將細胞從壁上吹下,不僅要控制吹打的力度、次數(shù),還要注意要將細胞盡可能吹成單個。這樣既能減少死細胞,又能便于細胞再次均勻貼壁生長。

    7.依據(jù)傳代比例,將細胞懸液分瓶,再補充培養(yǎng)基后,靜置于溫箱培養(yǎng),直止貼壁。

     

    貼壁細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后,繼續(xù)生長的空間不足,培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成份也消耗較多,同時代謝廢物也有較多堆積,需要分瓶培養(yǎng),對細胞進行傳代擴增。對于貼壁不太緊的細胞如293,可以直接吹散后分瓶。而對于貼壁較緊的細胞如CHO,則需要以胰酶消化后再吹散分瓶。以筆者的經(jīng)驗,以輕吹或加培養(yǎng)液后輕搖可下較好,但對于經(jīng)驗不太充分的實驗者而言是較難判斷掌握的。

     

    胰酶消化的程度是一個關(guān)鍵:消化過度則對細胞的活性影響較大,并有部分細胞漂浮,隨棄去的胰酶流失;消化不足則細胞難于從瓶壁上吹下,反復(fù)吹打同樣也會損傷細胞活性。影響消化速度的因素較多,主要有胰酶溶液的活性(配制條件、凍存或4℃保存時間長短、是否反復(fù)凍融、解凍后存放時間及溫度等)、消化時的溫度(氣溫、細胞培養(yǎng)瓶及胰酶溶液的溫度)以及所加胰酶溶液的多少等。含有EDTA的胰酶會比不含的消化能力強很多,不同細胞對消化液的敏感性也不同,比如HEP-G2人肝癌細胞,該細胞消化時間可長達10分鐘左右。 消化時間仔細去摸索一下,每過2分鐘鏡下觀察細胞是否變圓,記錄*消化時間,下一次操作參考之前的記錄來控制時間即可。

     

    對于懸浮細胞換液時只需要補液就行。

    懸浮細胞的傳代則不需要用胰酶消化,直接通過計數(shù)算好傳代的比例,直接分瓶,補液。有些懸浮細胞趨于成團生長,此時細胞生長狀態(tài)良好,當補液時,避免吹打。典型實例:jurkat就是成團生長。當jurkat細胞密度比較大時,可將培養(yǎng)瓶豎直放置2分鐘左右,待大部分細胞沉下,吸走上層清液,補充等量的新鮮培養(yǎng)基。

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